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纯化小技巧 | MaXtar® COLL 400/700病毒应用分享


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百林科多模式层析填料家族中,有这么一类特殊的填料,凭借其独特的填料结构,发挥凝胶过滤吸附层析的双重特性,专为超大分子设计。


包括MaXtar® COLL 400MaXtar® COLL 700两种,分别适用于分子量超过400 KD和700 KD的超大分子


MaXtar® COLL 400/700产品简介

独特的双层结构设计,外壳是多孔的钝化层 ,确保 400 KD或700 KD 以上的大分子不会进孔,直接走外水流穿;核心是偶联了同时具有疏水和吸附负电荷作用基团的球形内核,最大程度结合宿主蛋白、 核酸等杂质。具有明显优势:

• 以流穿模式处理400 KD 或700 KD 以上的大分子,工艺优化更容易,更方便线性放大。

• 改良的MaXtar® 基架具有更强刚性,因此在较低的反压下能够实现更高工艺流速,提高工艺效率。

• 相比于传统的凝胶过滤层析,拥有更大的上样量,更高流速,生产效率大大提升。

• 耐受范围广,化学稳定性好。

• 适用于病毒及类病毒颗粒等生物大分子分离。


如何选择MaXtar® COLL 400/700

• MaXtar® COLL 400:如有病毒/大分子在MaXtar® COLL 700上收率不佳,有明显吸附现象,可尝试选择更小孔径的MaXtar® COLL 400进行优化。

• MaXtar® COLL 700:主要适用分子量大于700KD(约30nm)的病毒/大分子。


MaXtar® COLL 400/700应用案例分享


案例一:MaXtar® COLL 400在VLP的应用 


图片1.png

图1:MaXtar® COLL 400纯化VLP图谱

样品:VLP(单体60kDa,120聚体)

柱体积:30ml

上样量:300ml

流速:7ml/min


表1新新.png

表1:MaXtar® COLL 400纯化结果


小结:结合层析图谱和胶图可见,纯度有明显提高,杂质去除明显。


案例二:MaXtar® COLL 700在慢病毒中的应用  


建议测试的工艺条件

样品信息:浓缩后样品

平衡Buffer: 20 mM PB,150 mM NaCl ,pH 7.5或1×DPBS,pH 7.5

CIP Buffer: 1 M NaOH,30%异丙醇  


图片2.png

图2:MaXtar® COLL 700纯化慢病毒图谱

表2新新.png

表2:MaXtar® COLL 700纯化结果


小结:回收率和杂质去除水平,均符合预期。 


MaXtar® COLL 400/700应用过程中的Tips


◆ 为最大程度发挥COLL系列内部的多种配基吸杂效果,建议在缓冲液中添加100~150mM NaCl;

◆ 由于杂质与内部配基之间的高效多模式结合,需要对填料进行有效清洁,建议使用1M NaOH, 30%异丙醇。

◆ 不推荐使用柠檬酸盐缓冲液,因为柠檬酸离子会与配基相互作用。


点击查看 多模式填料完整资料

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