在蛋白、抗体、核酸及多糖等生物大分子的纯化过程中,凝胶过滤层析介质(分子筛)凭借其温和、非吸附的分离机制,始终是精细纯化环节不可或缺的一步。对其分辨率、通量及操作便捷性的追求,也从未停止。
今天,我们要向大家介绍一位“老朋友”,一款专注高分辨率、兼顾灵活上样量的分子筛预装柱——Geldex® 200PG 16/600。

图1:Geldex® 200PG 16/600
技术参数

表1:Geldex® 200PG 16/600技术参数
优异的分离性能
为了验证Geldex® 200PG 16/600的实际分辨能力,我们在标准条件下进行了典型蛋白混合物的分离测试。图2展示了Geldex® 200 PG 16/600能够在10-600kDa范围内出色分离出17~440kDa的5种蛋白质,表现出优异的分离性能。
层析柱:Geldex® 200 PG 16/600预装
样品:
肌红蛋白, 5.4mg/mL, Mr 17 000
卵清蛋白, 36mg/mL, Mr 44 000
HSA, 36mg/mL, Mr 66 000
IgG, 2.8mg/mL, Mr 158 000
马脾铁蛋白, 3.4mg/mL, Mr 440 000
流速:1mL/min (30 cm/h)
缓冲液:10mM PB, 140mM NaCl, 2.7mM KCl, pH 7.4 (PBS)

图2:Geldex® 200 PG 16/600预装柱对标准蛋白的选择性比较
灵活的上样容量
分子筛的一大挑战是如何在分辨率与上样量之间取得平衡。我们测试了不同上样体积下的纯化表现:图3显示,当上样体积建议控制在0.5-4%CV(柱体积)时,Geldex® 200 PG 16/600预装柱具有较好的分辨率。
层析柱:Geldex® 200 PG 16/600预装柱
样品:
肌红蛋白, 0.75mg/mL, Mr 17 000
卵清蛋白, 5mg/mL, Mr 44 000
HSA, 5mg/mL, Mr 66 000
IgG, 0.2mg/mL, Mr 158 000
马脾铁蛋白, 0.48mg/mL, Mr 440 000
样品体积:0.1mL(0.08%),0.5mL(0.42%),1.2mL(1%),2.4mL(2%),3.6mLl(3%),4.8mL(4%),6mL(5%)
流速:1mL/min (30 cm/h)
缓冲液:10mM PB,140mM NaCl,2.7mM KCl, pH 7.4 (PBS)

图3:Geldex® 200 PG 16/600预装柱对不同上样体积分辨率影响
稳定的压力流速 在流速与压力的关系上,我们测定了Geldex® 200 PG 16/600预装柱的压力-流速曲线:图4显示,在室温条件下,用水和PBS测试,Geldex® 200 PG 16/600预装柱流速≤180cm/h时,压力<5 bar(0.5MPa, 72.5 psi)。推荐操作流速为1–2mL/min(对应线性流速约30–60 cm/h),在此流速范围内,压力小于0.15MPa,远低于填料的耐压上限。

图4:Geldex® 200 PG 16/600预装柱压力流速性能表现
应用分享——去除聚体 图5纯化结果显示,使用Geldex® 200 PG 16/600可以有效纯化目的蛋白(150KDa),去除聚体等杂质。 层析柱:Geldex® 200 PG 16/600预装柱 样品:目的蛋白 (150kDa, 上样2mL) 流速:1mL/min (30cm/h) 缓冲液:20mM PB, 50mM NaCl, pH7.0

图5:Geldex® 200 PG纯化目的蛋白
全规格覆盖一站配齐 在凝胶过滤层析的实际应用中,样品量决定了纯化方案的选择。对于日常快速纯化,Geldex® 200 PG 16/600预装柱无疑是实验室的首选,兼顾高分辨率与高效流速;当样品量提升至中试或批量制备级别时,百林科同样提供Geldex® 200 PG 26/600预装柱,在保持相同分离性能的前提下显著提高单批次处理通量;而面向大规模工业生产,百林科还提供Geldex® 200 PG散装填料,可根据需求自由装填任意规格的工业级层析柱。从微克级分析到公斤级生产,Geldex® 200 PG提供全程可放心的纯化解决方案。
产品货号

表2、3:产品货号
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