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纯化小技巧 | 抗体研究生产中的“好物分享”——层析介质篇


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随着抗体药的发展,抗体的靶点由单一靶向转向两个或者多个靶向,相对应的研究和生产工艺流程遇到的挑战也在升级,百林科多款重磅产品,在抗体应用领域表现亮眼。


抗体生产工艺流程图


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 表达量测定——ChromaX® A20

细胞收获之后,需要对细胞液进行精准定量。百林科ChromaX® A20是一款能够快速、准确测定细胞培养上清液中的抗体浓度(或滴度)而设计的Protein A亲和色谱分析柱,是以多孔结构的聚苯乙烯 - 二乙烯基苯(PS-DVB)微球为填充载体,重组 Protein A 为配基,通过特有的表面处理技术和偶联技术研制而成的。

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ChromaX® A20 亲和色谱柱特点:



• 亲水 PS-DVB 基材,具有刚性好,反压低,传质快的特性。

• 独有的亲水处理技术,使非特异性吸附降至最低,确保抗体浓度测试结果的准确性。

• Protein A 特异性结合 IgG 的 Fc 区域,高选择性保证浓度测定结果的准确。

• 不锈钢柱体,可在 HPLC 上直接使用。

• 快速高效,2~5 min 内即可完成一次分析。

• 在抗体浓度 0.02~10 mg/mL 的宽范围内具有良好的线性。

• 采用耐碱 Protein A 配基,可以用 0.1 M NaOH 溶液对色谱柱进行再生。




ChromaX®A20良好的线性关系:



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在单抗培养上清液较宽浓度范围内线性关系良好,高达0.9999


抗体分离纯化



抗体纯化主流工艺步骤主要包括Protein A 的捕获和两步精细纯化步骤,百林科提供相应解决方案如下:

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一)抗体捕获—MaXtar® ARPA



蛋白A亲和填料MaXtar® ARPA被广泛用于抗体纯化的捕获步骤。由于蛋白A通过Fc区特异性结合抗体,这一步可以显著减少过程相关杂质,包括宿主细胞蛋白和核酸。其自上市以来,在单抗、双抗和Fc融合蛋白均有较好应用,具有核心竞争力:

• 高耐碱的蛋白A配基,具有完全的自主知识产权。

• 高度交联的琼脂糖基架,且粒径均一。

• 稳定的批间一致性。

• 完善的法规支持文件RSF。

• 产能大,货期短,供应链稳定,性价比高。


MaXtar® ARPA 拥有

高载量、高流速、耐碱的特性:




以Fc融合蛋白为例,在0.5M NaOH累计浸泡0h、12h、24h、48h后测试DBC10%动态结合载量。图1数据可见:0.5M NaOH浸泡48h后,MaXtar® ARPA的动态载量保持80%以上的初始载量水平。




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图1:各阶段DBC数据


MaXtar® ARPA稳定的批间一致性



对比测试三个不同批次的填料A(进口品牌)和MaXtar® ARPA,图2和图3数据可见:3批次MaXtar® ARPA动态结合载量RSD仅2%,批间差异小于填料A;且MaXtar® ARPA回收率 RSD小于1%,批次间一致性较好。 



图表2.png

图2:填料批次间DBC差异

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图3:填料批次间回收率差异


(二)抗体精纯—MaXtar®  MMA


MaXtar® MMA是一款多模式填料,常用于抗体纯化中的精纯阶段,可以去除聚集体、蛋白A配基、HCP、DNA 和病毒等多种杂质,且具有明显的性能优势:

• 改良的 MaXtar® 基架具有更强刚性,因此在较低的反压下能够实现更高工艺流速,提高工艺效率。

• 高动态载量,一步结合大部分杂质,节约时间和成本。

• 耐受广泛的 pH 和电导率范围,有助于摸索最优工艺条件。

• 多用于挑战性样品的纯化,尤其对聚集体去除表现突出。




MaXtar® MMA流穿模式去除聚集体

使用双抗亲和收获样品,对MaXtar® MMA的除聚体能力进行研究,发现纯度由91.8%提升至99.5%,双抗的聚集体含量由 6.0% 下降到至 0.5%,聚集体去除效果明显。


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图5:MaXtar® MMA层析前后SEC-HPLC检测图谱

(左图为纯化层析前纯度占比91.8%,聚集体占比6.0%;

右图为层析后纯度占比99.6%,聚集体占比0.5%)


(三)抗体精纯—MaXtar®  S HC


阳离子交换层析介质通常用在纯化中的精纯步骤,以去除HCP等痕量杂质。随着研发人员对产品纯化的高要求,使用者对填料提出了高载量和回收率,兼具高选择性价比的要求。在这种背景下,百林科通过不断努力创新,研发出具有高载量高分辨率的阳离子交换层析介质-- MaXtar® S HC。




MaXtar® S HC 拥有高载量特性:

采用CHO细胞表达的单克隆抗体(精纯后蛋白)作为样品,对MaXtar® S HC的DBC(动态结合载量)进行探索,发现:MaXtar® S HC的DBC是常规阳离子的2倍。 

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表1. MaXtar® S HC在QB10的动态结合力




MaXtar® S HC 拥有高回收率的特性:

采用CHO细胞表达的单克隆抗体(精纯后蛋白)作为样品进行测试,洗脱回收率可以达到97%以上。

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表2. MaXtar® S HC的纯化结果



点击查看 抗体纯化亲和填料的完整资料

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