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纯化小技巧 | 蓝胶亲和介质及应用


蓝胶亲和是将Cibacron Blue通过三嗪偶联方法共价连接到琼脂糖基架上而制成的亲和层析介质。蓝色染料Cibacron Blue最早用于衣料染色,后发现其可与多种蛋白质结合,如白蛋白、脂蛋白、干扰素、凝血因子;也可与多种酶结合,如激酶、脱氢酶和大多数需要含腺苷辅因子的酶(如 NAD+)。


Cibacron Blue是一种蒽醌衍生物,其结构中含有芳香环、氨基、磺酸基等官能团,可以与蛋白分子产生疏水、氢键、静电作用。蓝胶亲和介质与不同蛋白产生结合的原理不同,洗脱条件也不尽相同。比如与白蛋白、透明质酸酶和一些限制性内切酶结合时,主要依赖离子交换作用,可以用NaCl梯度进行洗脱;与脱氢酶和激酶结合于酶的核苷酸结合位点,可以通过添加核苷酸NAD/NADP进行洗脱;与人成纤维干扰素结合则以疏水作用为主,需要使用乙二醇洗脱。



百林科蓝胶亲和产品

表1更新3.png

表1:百林科蓝胶亲和产品信息



应用案例


应用案例一:

Blue Chromstar® FF纯化透明质酸酶


  • 层析柱信息: Blue Chromstar® FF,100×7.7mm,Volume:4.7mL。

  • 实验参数

    上样载量:5.1 g/L,RT:4.7min

表2更新.png

表2:Blue Chromstar® FF纯化透明质酸酶实验参数


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图1:层析图谱


表3更新.png

表3:检测结果


实验结论:经过Blue Chromstar® FF捕获纯化,主峰纯度从33.8%提高到74.2%,洗脱收率50.6%。纯度与进口竞品一致,收率高于进口竞品。



应用案例二:

Blue Chromstar® FF

纯化组织型纤溶酶原激活剂


新建ppt6.6更新.png

表4:纯化结果


实验结论:测试两个批次的Blue Chromstar® FF填料,样品的活性回收率达80%以上,批间表现稳定,与进口竞品基本一致。




订货信息


产品货号更新.png

表5:产品货号

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