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从 T 细胞激活到纯化:多糖疫苗蛋白载体技术干货


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由于对多糖的免疫反应不足,因而针对多糖包裹病原体的疫苗的开发颇具挑战性。特别是在幼儿中,多糖疫苗只能引起 b 细胞反应,所以虽然产生了抗体,但没有长期的记忆,重复使用的剂量似乎并不有益,而且可能导致抗体浓度低于初次免疫后的抗体浓度。通过与蛋白载体结合,已经克服了多糖疫苗缺乏 t 细胞反应的问题。这引发了 t 细胞反应,产生抗体和免疫记忆。


虽然作用机制尚不完全清楚,但多糖结合疫苗比普通多糖有几个优势:

  • b 细胞介导的免疫疫苗

  • 诱导更高的抗体浓度,产生更长的时间

  • 对幼儿的高免疫原性

  • 重复剂量增强免疫反应而不引起低反应性

  • 载体蛋白可诱导对自身的免疫反应,因此结合疫苗可能诱导对载体蛋白来源的病原体的免疫

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目前常见的载体蛋白主要包含(破伤风毒素(tetanus toxoid TT), 白喉毒素(diphtheria toxin, DT),白喉无毒突变体CRM197 ,流感嗜血杆菌蛋白D(Protein DD,PD )。


本文总结了以下4种载体蛋白的纯化方案:



1.破伤风毒素(tetanus, toxoid TT)

破伤风类毒素(TT)由破伤风杆菌产生的神经蛋白质毒素脱毒获得分子量150 kD。

图片4.jpg



2.白喉毒素(diphtheria toxin, DT)

由白喉毒素(diphtheria toxin, DT)脱毒获得是由感染了 ß 噬菌体的白喉杆状菌产生的细菌外毒素分子量58 kD。

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3.白喉无毒突变体CRM197

作为无细胞百白破和结合疫苗中的载体被广泛应用。


美国FDA批准上市的Prevnar 和 Prevnar 13肺炎疫苗使用的蛋白载体即为CRM197。


由于天然CRM197产量较低,制约了产业化,也是该疫苗价格昂贵的原因之一。

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案例1:

Q Chromstar® FF 预装层析柱,CV:4.7mL

表1更新.jpg

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小结:第一步阴离子层析采用0.15M NaCl洗脱可得到较纯的样品。


案例2:

MaXtar® Phenyl HR 预装层析柱,CV:4.7mL

表2更新1111.jpg

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小结:经过阴离子层析后的样品再经过疏水层析后样品纯度可达到95%以上。



4.流感嗜血杆菌蛋白D(Protein D,PD )

流感嗜血杆菌蛋白D(Protein D,PD )是高度保守的表面脂蛋白。


存在于所有可分型Hi、不可分型Hi(NTHi),是一种具有甘油磷脂二酯酶活性的细菌毒力因子,能导致宿主上皮细胞释放磷酸胆碱在Hi引起呼吸道感染过程中起重要作用,分子量42 kD。

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综上,百林科在载体蛋白项目的纯化上积累了丰富的工艺开发经验。作为生物工艺核心设备与关键耗材整体解决方案供应商,我们不仅提供层析介质,也提供相应的层析设备及层析柱,超滤系统以及其他相关产品。此外,我们诚挚欢迎大家咨询更多产品线信息。我们技术支持团队可以全程协助大家做工艺开发与优化服务,以及协助大家项目转移等桥接服务。


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