生物制药的下游纯化工艺中,疏水填料占据着重要地位。疏水层析(HIC)利用蛋白质或生物分子表面疏水性差异,通过高盐环境下疏水基团与固定相疏水配基可逆结合的机制,在聚集体去除及杂蛋白纯化等关键环节中发挥着不可替代的作用。其中,MaXtar® Butyl HR疏水填料凭借其分辨率高、疏水性适中、成本较低的优异特性,在抗体及重组蛋白等项目的纯化中发挥着重要作用。下面,就为大家详细介绍这款性能优异的疏水层析产品。
一、产品核心性能优势
MaXtar® Butyl HR是一款基于丁基(Butyl)配基的疏水相互作用层析(HIC)填料。MaXtar® Butyl HR的核心优势在于: 分离效果优异,杂质无所遁形 MaXtar® Butyl HR 优异的分离性能主要取决于粒径的分布,平均粒径为 40μm,整体粒径较小,且基于疏水层析原理,可以有效分离结构相似的杂质,在抗体(双抗),重组蛋白以及疫苗中发挥着重要作用。 应用案例一 样品信息:双特异性抗体(pI 8-9) 柱体积:4.7mL(H=10cm) 平衡缓冲液:100mM PB,1M (NH4)2SO4 ,pH 7.0 洗脱缓冲液:100mM PB,pH 7.0 载量:20mg/mL

图1:双抗纯化层析图谱1

表1. 双抗纯化前后SEC纯度表现
小结:MaXtar® Butyl HR在此双抗的纯化中具有优异的分离效果,其中高分子杂质去除能力尤为显著,高分子杂质基本去除,最终SEC纯度达到99.8%。 应用案例二 样品信息:双特异性抗体 柱体积:4.7mL(H=10cm) 平衡缓冲液:20mM PB,1M (NH4)2SO4 ,pH 7.0 洗脱缓冲液:20mM PB,pH7.0 载量:20g/L

图2:双抗纯化层析图谱2

表2:双抗纯化后纯化表现
小结:MaXtar® Butyl HR纯化后,SEC与CE_NR纯度具有显著提升,双抗SEC纯度由76.6%提高至98.8% ,CE_NR纯度由75.1%提高至96.3% 。
批间差异可控,质量保障在线 图3:MaXtar® Butyl HR三批填料疏水性表征 小结:使用单抗对MaXtar® Butyl HR 三批填料进行疏水性表征,不同批次峰型与出峰位置基本一致,疏水性无明显差异。 压力与流速兼得,助力工业化生产 1、压力流速曲线

图4:MaXtar® Butyl HR压力流速曲线
2、生产装柱

表3 & 图5:200/500层析装柱
小结:MaXtar® Butyl HR基于MaXtar高流速改良琼脂糖基架,在D=300cm,H=15cm条件下,压力达到3bar时,最大流速为330cm/h,已成功应用于工业化生产。
二、应用技巧
1.上样盐溶液选择 在工艺开发初期,需对上样盐溶液进行选择。对于MaXtar® Butyl HR疏水填料,建议优先采用(NH₄)₂SO₄进行线性洗脱。若在此条件下目标蛋白洗脱困难或无法有效洗脱,可更换为NaCl体系继续优化洗脱条件。
2.洗脱过程优化 在疏水填料的线性洗脱过程中,若样品分呈现出明显的分离趋势,可进一步发展为步级洗脱并最终优化至一步洗脱;若蛋白分离效果较差,可适当降低上样载量或延长线性洗脱的柱体积,以提升目标蛋白的分离度。
3、影响因素控制 疏水层析的影响因素较多,包括温度、上样载量、上样溶液的pH值及盐浓度等,均会对填料的疏水性能产生显著影响。因此,在方法开发过程中,需关注上述因素对分离选择性与分辨率的影响,从而为后续工艺放大与稳健性验证奠定基础。
三、产品货号

表4:产品货号
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